vuzbiochemiИзвестия вузов. Прикладная химия и биотехнологияProceedings of Universities. Applied Chemistry and Biotechnology2227-29252500-1558ИРНИТУ10.21285/2227-2925-2023-13-1-88-98vuzbiochemi-963Research ArticleФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ БИОЛОГИЯPHYSICOCHEMICAL BIOLOGYВлияние акрилатных гидрогелей на основные параметры культивирования и антагонистическую активность агрономически полезных бактерийEffect of acrylate-based hydrogels on basic cultivation parameters and antagonistic activity of soil beneficial bacteriahttps://orcid.org/0000-0001-5401-0579КрыжкоА. В.KryzhkoA. V.

Крыжко Анастасия Владимировна - кандидат сельскохозяйственных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной генетики, протеомики и биоинформатики в сельском хозяйстве НИИСХ Крыма.

295453, Симферополь, ул. Киевская, 150

Anastasiia V. Kryzhko - Cand. Sci. (Agriculture), Leading Researcher, Laboratory of Molecular Genetics, Proteomics and Bioinformatics in Agriculture, Research Institute of Agriculture of Crimea.

150, Kievskaya St., Simferopol, 295453

nk_lib@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6569-0602ДидовичС. В.DidovichS. V.

Дидович Светлана Витальевна - кандидат сельскохозяйственных наук, ведущий научный сотрудник НИИСХ Крыма.

295453, Симферополь, ул. Киевская, 150

Svetlana V. Didovich - Cand. Sc. (Agriculture), Leading Researcher, Research Institute of Agriculture of Crimea.

150, Kievskaya St., Simferopol, 295493

sv-alex.68@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5268-9557СорокинА. В.SorokinA. V.

Сорокин Андрей Викторович - младший научный сотрудник лаборатории метагеномики и пищевых биотехнологий, ВГУИТ; младший научный сотрудник кафедры биофизики и биотехнологии, ВГУ; младший научный сотрудник НИЛ «Биоресурсный потенциал приморской территории», СевГУ.

394036, Воронеж, пр. Революции, 19; 394018, Воронеж, Университетская пл., 1; 299053, Севастополь, ул. Студенческая, 33

Andrey V. Sorokin - Junior Researcher, Metagenomics and Food Biotechnologies Laboratory, Voronezh State University of Engineering Technologies; Junior Researcher, Biophysics and Biotechnology Department, Voronezh State University; Junior Researcher, Bioresource Potential of the Seaside Territory Laboratory, Sevastopol State University.

19, Revolutsii Ave., Voronezh, 394036; 1, Universitetskaya Sq., Voronezh, 394018; 33, Studencheskaya St., Sevastopol, 299053

andrew.v.sorokin@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-9058-027XЛавлинскаяМ. С.LavlinskayaM. S.

Лавлинская Мария Сергеевна - старший научный сотрудник лаборатории метагеномики и пищевых биотехнологий, ВГУИТ; старший научный сотрудник кафедры биофизики и биотехнологии, ВГУ; старший научный сотрудник НИЛ «Биоресурсный потенциал приморской территории», СевГУ.

394036, Воронеж, пр. Революции, 19, Российская Федерация; 394018, Воронеж, Университетская пл., 1; 299053, Севастополь, ул. Студенческая, 33

Maria S. Lavlinskaya - Senior Researcher, Metagenomics and Food Biotechnologies Laboratory, Voronezh State University of Engineering Technologies; Senior Researcher, Biophysics and Biotechnology Department, Voronezh State University; Senior Researcher, Bioresource Potential of the Seaside Territory Laboratory, Sevastopol State University.

19, Revolutsii Ave., Voronezh, 394036; 1, Universitetskaya Sq., Voronezh, 394018; 33, Studencheskaya St., Sevastopol, 299053

maria.lavlinskaya@gmail.comСевастопольский государственный университет; Научно-исследовательский институт сельского хозяйства КрымаРоссияSevastopol State University; Research Institute of Agriculture of CrimeaRussian FederationСевастопольский государственный университет; Воронежский государственный университет инженерных технологий; Воронежский государственный университетРоссияSevastopol State University; Voronezh State University of Engineering Technologies; Voronezh State UniversityRussian Federation2023050420231318898Copyright © Крыжко А.В., Дидович С.В., Сорокин А.В., Лавлинская М.С., 20232023Крыжко А.В., Дидович С.В., Сорокин А.В., Лавлинская М.С.Kryzhko A.V., Didovich S.V., Sorokin A.V., Lavlinskaya M.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vuzbiochemi.elpub.ru/jour/article/view/963

Целью работы являлось исследование влияния полимерных акрилатных гидрогелей на рост и развитие агрономически полезной микрофлоры - штаммов азотфиксаторов, фосфатмобилизаторов, энтомопатогенов и антагонистов фитопатогенов. Антибактериальное действие гидрогелей изучали методом лунок в чашках Петри по Й. Сэги. Культивирование бактерий проводили в ГРМ-бульоне, определение оптической плотности среды осуществляли при 600 нм с периодичностью 1 ч в течение 48 ч. Исследование биопленкообразования вели на среде LB согласно методу O'Toole, Kolter (1998). В стерильную среду вносили образцы гидрогелей в концентрации 200; 100; 50; 25 и 12,5 мг/мл. Установлено, что штаммы Paenibacillus polymyxa П, Agrobacterium tumefacience 204 и энтомопатогены Bacillus thuringiensis 0271, B. thuringiensis 0371 не проявляют признаков угнетения в зоне взаимодействия как с эталонными, так и с экспериментальными гидрогелями, а рост культур штаммов Azotobacter vinelandii 10702, Bradyrhizobium ottawaense М-8 и Rhizobium leguminosarum К-29 был ингибирован во всех вариантах опыта. Исследованные суспензии гидрогелей ГГ1 и ГГ2 в концентрации 200 мг/мл способствовали уменьшению оптической плотности культур как штамма B. amyloliquefaciens 01-1, так и штамма Lelliottia nimipressurales 32-3 в среднем на 23,3 и 14,7% к контролю соответственно. Внесение в питательную среду 25-100 мг/мл ГГ2 способствует активному накоплению биомассы культурами P. polymyxa П и A. tumefacience 204. Гидрогели способствовали усилению биопленкообразования B. amyloliquefaciens 01-1 в концентрации 50-200 мг/мл (ГГ1) и 100-200 мг/мл (ГГ2). Максимальную стимуляцию образования планктонной культуры и биопленки наблюдали при обогащении питательной среды 12,5-100 мг/мл ГГ1 у культуры штамма P. polymyxa П, выражавшуюся в увеличении интенсивности прироста бактериальной суспензии в среднем в 8,9 раз к контролю.

We study the effect of polymeric acrylate-based hydrogels on the growth and development of soil beneficial microflora, including nitrogen-fixing and phosphate-mobilizing microorganisms, entomopathogens and phytopathogen antagonists. The antibacterial effect of hydrogels (HG) was studied by the volume displacement method in Petri dishes according to Ye. Sagi. Bacteria were cultured in GRM broth; the optical density of the medium was determined at 600 nm at 1 h intervals for 48 h. The process of biofilm formation was studied in LB medium according to the method of O'Toole and Kolter (1998). HG samples were added to sterile medium at concentrations of 200, 100, 50, 25 and 12.5 mg/ml. The Paenibacillus polymyxa P and Agrobacterium tumefacience 204 strains, as well as the Bacillus thuringiensis 0271 and B. thuringiensis 0371 entomopathogens, showed no signs of inhibition in the interaction zone with both control and experimental HG. At the same time, the culture growth of the Azotobacter vinelandii 10702, Bradyrhizobium ottawaense M-8 and Rhizobium leguminosarum K-29 strains was inhibited in all the experiment variants. The investigated hydrogel suspensions HG1 and HG2 at a concentration of 200 mg/ml contributed to a decrease in the optical density of cultures of both B. amyloliquefaciens 01-1 and Lelliottia nimipressurales 32-3 by on average 23.3 and 14.7%, respectively, compared to the control. Introduction of HG2 into a nutrient medium in the amount of 25-100 mg/ml promoted active accumulation of biomass by P. polymyxa P and A. tumefacience 204. The HG1 and HG2 hydrogels at concentrations of 50-200 mg/ml and 100-200 mg/ml, respectively, enhanced the biofilm formation of B. amyloliquefaciens 01-1. The maximum stimulation of plankton culture and biofilm formation was observed when the P. polymyxa P strain culture was enriched with 12.5-100 mg/ml of HG1, which increased the intensity of bacterial suspension growth by on average 8.9 times compared to the control.

гидрогельагрономически полезная микрофлораштаммантагонистическая активностьhydrogelsoil beneficial microflorastrainantagonistic activityИсследование выполнено при финансовой поддержке программы «Приоритет-2030» Севастопольского государственного университета (стратегический проект № 3, № 121121700318-1).The research was carried out with the financial support of the «Priority 2030» program of Sevastopol State University (strategic project no. 3, no. 121121700318-1).ReferencesRodrigues S.H., Lima I.S., Neris L.M.L., Silva A.S., Santos N., Ariane M.S., et al. Superabsorbent hydrogels based to polyacrylamide/cashew tree gum for the controlled release of water and plant nutrients // Molecules. 2021. Vol. 26, no. 9. P. 119-128. https://doi.org/10.3390/molecules26092680.Rodrigues S.H., Lima I.S., Neris L.M.L., Silva A.S., Santos N., Ariane M.S., et al. Superabsorbent hydrogels based to polyacrylamide/cashew tree gum for the controlled release of water and plant nutrients. Molecules. 2021;26(9):119-128. https://doi.org/10.3390/molecules26092680.Sabyasachi B., Prakash M. Superabsorbent polymers in agriculture and other applications: a review // Polymer-Plastics Technology and Materials. 2019. Vol. 59, no. 6. P. 1-16. http://dx.doi.org/10.1080/25740881.2019.1647239.Sabyasachi B., Prakash M. Superabsorbent polymers in agriculture and other applications: a review. Polymer-Plastics Technology and Materials. 2019;59(6):1-16. http://dx.doi.org/10.1080/25740881.2019.1647239.Рабаданов Р.Г. Абсорбционные свойства сильно набухающих полимерных гидрогелей, используемых в сельском хозяйстве // Аграрная Россия. 2017. N 6. С. 2-7. http://dx.doi.org/10.30906/1999-5636-2017-6-15-18.Rabadanov R.G. Absorption properties of higly swelling polymeric hydrogels used in agriculture. Agrarnaya Rossiya. 2017;(6):2-7. (In Russian). http://dx.doi.org/10.30906/1999-5636-2017-6-15-18.Rizwan M., Rubina G.S., Iqbal D.A., Naseem S. Materials diversity of hydrogel: synthesis, polymerization process and soil conditioning properties in agricultural field // Journal of Advanced Research. 2021. Vol. 33. P. 15-40. http://doi.org/10.1016/j.jare.2021.03.007.Rizwan M., Rubina G.S., Iqbal D.A., Naseem S. Materials diversity of hydrogel: synthesis, polymerization process and soil conditioning properties in agricultural field. Journal of Advanced Research. 2021;33:15-40. http://doi.org/10.1016/j.jare.2021.03.007.Наумов П.В., Щербакова Л.Ф., Околелова А.А. Оптимизация влагообеспеченности почв с помощью полимерных гидрогелей // Известия Нижневолжского агроуниверситетского комплекса: наука и высшее профессиональное образование. 2011. N 4. С. 77-81.Naumov P.V., Shcherbakova L.F., Okolelova A.A. Soil moisture optimization using polymer hydrogels. Izvestiya nizhnevolzhskogo agrouniversitetskogo kompleksa: nauka i vysshee professional'noe obrazovanie = Proceedings of Lower Volga Agro-University Complex: Science and Higher Education. 2011;(4):77-81. (In Russian).Guilherme M.R., Aouada F.A., Fajardo A.R., Martins A.F., Paulino A.T., Davi M.F.T., et al. Superabsorbent hydrogels based on polysaccharides for application in agriculture as soil conditioner and nutrient carrier: a review // European Polymer Journal. 2015. Vol. 72. P. 365-385. https://doi.org/10.1016/j.eur-polymj.2015.04.017.Guilherme M.R., Aouada F.A., Fajardo A.R., Martins A.F., Paulino A.T., Davi M.F.T., et al. Superabsorbent hydrogels based on polysaccharides for application in agriculture as soil conditioner and nutrient carrier: a review. European Polymer Journal. 2015;72:365-385. https://doi.org/10.1016/j.eurpolymj.2015.04.017.Mehrotra T., Zaman M.N., Prasad B.B., Shukla A., Aggarwal S., Singh R. Rapid immobilization of viable Bacillus pseudomycoides in polyvinyl alcohol/glutaral-dehyde hydrogel for biological treatment of municipal wastewater // Environmental Science and Pollution Research. 2020. Vol. 27, no. 9. P. 9167-9180. https://doi.org/10.1007/s11356-019-07296-z.Mehrotra T., Zaman M.N., Prasad B.B., Shukla A., Aggarwal S., Singh R. Rapid immobilization of viable Bacillus pseudomycoides in polyvinyl alcohol/glutar-aldehyde hydrogel for biological treatment of municipal wastewater. Environmental Science and Pollution Research. 2020;27(9):9167-9180. https://doi.org/10.1007/s11356-019-07296-z.Du X., Zhou J., Shi J., Xu B. Supramolecular hydrogelators and hydrogels: from soft matter to molecular biomaterials // Chemical Reviews. 2015. Vol. 115, no. 24. P. 13165-13307. https://doi.org/10.1021/acs.chemrev.5b00299.Du X., Zhou J., Shi J., Xu B. Supramolecular hydrogelators and hydrogels: from soft matter to molecular biomaterials. Chemical Reviews. 2015;115(24):13165-13307. https://doi.org/10.1021/acs.chemrev.5b00299.Lipowczan A., Trochimczuk A.W. Phosphates-containing interpenetrating polymer networks (IPNs) acting as slow release fertilizer hydrogels (SRFHs) suitable for agricultural applications // Materials. 2021. Vol. 14, no. 11. P. 2893. https://doi.org/10.3390/ma14112893.Lipowczan A., Trochimczuk A.W. Phosphates-containing interpenetrating polymer networks (IPNs) acting as slow release fertilizer hydrogels (SRFHs) suitable for agricultural applications. Materials. 2021;14(11):2893. https://doi.org/10.3390/ma14112893.Abd El-Aziz M.E., Morsi S.M.M., Salama D.M., Abdel-Aziz M.S., Abd Elwahed M.S., Shaaban E.A., et al. Preparation and characterization of chitosan/polyacryl-ic acid/copper nanocomposites and their impact on onion production // International Journal of Biological Macromolecules. 2019. Vol. 123. P. 856-865. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.11.155.Abd El-Aziz M.E., Morsi S.M.M., Salama D.M., Abdel-Aziz M.S., Abd Elwahed M.S., Shaaban E.A., et al. Preparation and characterization of chitosan/poly-acrylic acid/copper nanocomposites and their impact on onion production. International Journal of Biological Macromolecules. 2019;123:856-865. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.11.155.AllcockH.R.,Pucher S.R., Fitzpatrick R.J., RashidK. Antibacterial activity and mutagenicity studies of water-soluble phosphazene high polymers // Biomaterials. 1992. Vol. 13, no. 12. P. 857-862. https://doi.org/0142-9612(92)90179-R.Allcock H.R., Pucher S.R., Fitzpatrick R.J., Rashid K. Antibacterial activity and mutagenicity studies of water-soluble phosphazene high polymers. Biomaterials. 1992;13(12):857-862. https://doi.org/0142-9612(92)90179-R.Praepanitchai O.A., Noomhorm A., Anal A.K. Survival and behavior of encapsulated probiotics (Lactobacillus plantarum) in calcium-alginate-soy protein isolate-based hydrogel beads in different processing conditions (pH and temperature) and in pasteurized mango juice // BioMed Research International. 2019. P. 9768152. https://doi.org/10.1155/2019/9768152.Praepanitchai O.A., Noomhorm A., Anal A.K. Survival and behavior of encapsulated probiotics (Lactobacillus plantarum) in calcium-alginate-soy protein isolate-based hydrogel beads in different processing conditions (pH and temperature) and in pasteurized mango juice. BioMed Research International. 2019:9768152. https://doi.org/10.1155/2019/9768152.Inal M., Yigitoglu M. Improvement of bioethanol productivity of immobilized Saccharomyces bayanus with using sodium alginate-graft-poly(N-vinyl-2-pyrro-lidone) matrix // Biotechnology and Applied Biochemistry. 2012. Vol. 168, no. 2. P. 266-278. https://doi.org/10.1007/s12010-012-9770-0.Inal M., Yigitoglu M. Improvement of bioethanol productivity of immobilized Saccharomyces bayanus with using sodium alginate-graft-poly(N-vinyl-2-pyrro-lidone) matrix. Biotechnology and Applied Biochemistry. 2012;168(2):266-278. https://doi.org/10.1007/s12010-012-9770-0.Rosenberg M., Rebros M., Kristofikova L., Malatova K. High temperature lactic acid production by Bacillus coagulans immobilized in LentiKats // Biotechnology Letters. 2005. Vol. 27, no. 23-24. P. 1943-1947. https://doi.org/10.1007/s10529-005-3907-y.Rosenberg M., Rebros M., Kristofikova L., Malatova K. High temperature lactic acid production by Bacillus coagulans immobilized in LentiKats. Biotechnology Letters. 2005;27(23-24):1943-1947. https://doi.org/10.1007/s10529-005-3907-y.Yang K., Han Q., Chen B., Zheng Y., Zhang K., Li Q., et al. Antimicrobial hydrogels: promising materials for medical application // International Journal of Nanomedicine. 2018. Vol. 13. P. 2217-2263. https://doi.org/10.2147/IJN.S154748.Yang K., Han Q., Chen B., Zheng Y., Zhang K., Li Q., et al. Antimicrobial hydrogels: promising materials for medical application. International Journal of Nanomedicine. 2018;13:2217-2263. https://doi.org/10.2147/IJN.S154748.Spagnul C., Greenman J., Wainwright M., Kamil Z., Boyle R.W. Synthesis, characterization and biological evaluation of a new photoactive hydrogel against gram-positive and gram-negative bacteria // Journal of Materials Chemistry B. 2016. Vol. 4, no. 8. P. 1499-1509. https://doi.org/10.1039/C5TB02569A.Spagnul C., Greenman J., Wainwright M., Kamil Z., Boyle R.W. Synthesis, characterization and biological evaluation of a new photoactive hydrogel against gram-positive and gram-negative bacteria. Journal of Materials Chemistry B. 2016;4(8):1499-1509. https://doi.org/10.1039/C5TB02569A.Smith M.J., Francis M.B. Methods for generating microbial cocultures that grow in the absence of fixed carbon or nitrogen // Methods in Molecular Biology. 2018. Vol. 1772. P. 45-60.Smith M.J., Francis M.B. Methods for generating microbial cocultures that grow in the absence of fixed carbon or nitrogen. Methods in Molecular Biology. 2018;1772:4560.Grumezescu A.M., Holban A.M. Materials for biomedical engineering. Hydrogels and polymer-based scaffolds. Amsterdam: Elsevier, 2019. 562 p.Grumezescu A.M., Holban A.M. Materials for biomedical engineering. Hydrogels and polymer-based scaffolds. Amsterdam: Elsevier; 2019. 562 p.Kretschmer M., Lieleg O. Chelate chemistry governs ion-specific stiffening of Bacillus subtilis B-1 and Azotobacter vinelandii biofilms // Biomaterials Science. 2020. Vol. 8, no. 7. P. 1923-1933. https://doi.org/10.1039/C9BM01763A.Kretschmer M., Lieleg O. Chelate chemistry governs ion-specific stiffening of Bacillus subtilis B-1 and Azotobacter vinelandii biofilms. Biomaterials Science. 2020;8(7):1923-1933. https://doi.org/10.1039/C9B-M01763A.Snigdha S., Kalarikkal N., Thomas S., Rad-hakrishnan E.K. Laponite clay/poly(ethylene oxide) gel beads for delivery of plant growth-promoting rhizobacteria // Bulletin of Materials Science. 2021. Vol. 44, no. 2. P. 215-228. https://doi.org/10.1007/s12034-021-02383-9.Snigdha S., Kalarikkal N., Thomas S., Radhakrishnan E.K. Laponite clay/poly(ethylene oxide) gel beads for delivery of plant growth-promoting rhizobacteria. Bulletin of Materials Science. 2021;44(2):215-228.Лавлинская М.С., Сорокин А.В. Разработка технологии получения суперабсорбента на основе отходов растениеводства // Материалы китайско-российского конкурса инноваций и предпринимательства - 2020. Воронеж, 2021. С. 34-37.Lavlinskaya M.S., Sorokin A.V. Development of technology for obtaining superabsorbent based on crop waste. Materialy kitaisko-rossiiskogo konkursa innovat-sii i predprinimatel’stva - 2020 = Materials of the Chinese-Russian Innovation and Entrepreneurship Competition - 2020. Voronezh, 2021; p. 34-37. (In Russian).Сэги Й. Методы почвенной микробиологии / пер. с венг. И.Ф. Куренного. М.: Колос, 1983. 296 с.Szegi J. Talajmikrobiologial vizsgalati modszerek; 1979. (Russ. ed.: Segi I. Metody pochvennoi mikrobiologii. Moscow: Kolos; 1983. 296 p.). (In Russian).Анганова Е.В., Савилов Е.Д., Ушкарева О.А., Аблов А.М., Духанина А.В. Способность патогенных и условнопатогенных энтеробактерий к формированию биопленок // Acta Biomedica Scientifica. 2014. N 5. С. 34-37.Anganova E.V., Savilov E.D., Ushkareva O.A., Ablov A.M., Dukhanina A.V. The ability of pathogenic and opportunistic enterobacteria to form biofilms. Acta Biomedica Scientifica. 2014;(5):34-37.Савилов Е.Д., Маркова Ю.А., Немченко У.М., Носкова О.А., Чемезова Н.Н., Кунгурцева Е.А. [и др.]. Способность к биопленкообразованию у возбудителей инфекций, выделенных от пациентов крупного многопрофильного детского стационара // Тихоокеанский медицинский журнал. 2020. Т. 1. С. 32-35.Savilov E.D., Markova Y.A., Nemchenko U.M., Noskova O.A., Chemezova N.N., Kungurtseva E.A., et al. The ability to biofilm formation in pathogens isolated from patients of a large multidisciplinary children's hospital. Tikhookeanskii meditsinskii zhurnal = Pacific Medical Journal. 2020;1:32-35. (In Russian).O'Toole G.A., Kolter R. Initiation of biofilm formation in Pseudomonas fluorescens WCS365 proceeds via multiple, convergent signalling pathways: a genetic analysis // Molecular Microbiology. 1998. Vol. 28, no. 3. P. 449-461. https://doi.org/10.1046/j.1365-2958.1998.00797.x.O'Toole G.A., Kolter R. Initiation of biofilm formation in Pseudomonas fluorescens WCS365 proceeds via multiple, convergent signalling pathways: a genetic analysis. Molecular Microbiology. 1998;28(3):449-461. https://doi.org/10.1046/j.1365-2958.1998.00797.x.Ярец Ю.И., Шевченко Н.И. Новый метод анализа бактериальной биопленки // Наука и инновации. 2016. Т. 10. С. 64-68.Yarets Yu.I., Shauchenka N.I. A new method for the bacterial biofilms analysis in medicine. Nauka i innovatsii. 2016;10:64-68. (In Russian).Christensen G.D., Simpson W.A., Younger J.J., Baddour L.M., Barrett F.F., Melton D.M., et al. Adherence of coagulase-negative staphylococci to plastic tissue culture plates: a quantitative model for the adherence of Staphylococci to medical devices // Journal of Clinical Microbiology. 1985. Vol. 22, no. 6. P. 996-1006.Christensen G.D., Simpson W.A., Younger J.J., Baddour L.M., Barrett F.F., Melton D.M., et al. Adherence of coagulase-negative staphylococci to plastic tissue culture plates: a quantitative model for the adherence of Staphylococci to medical devices. Journal of Clinical Microbiology. 1985;22(6):996-1006.Хайлафян А.А. Современные статистические методы медицинских исследований. М.: ЛЕНАРД, 2014. 320 с.Khailafyan A.A. Modern statistical methods of medical research. Moscow: LENARD; 2014. 320 p. (In Russian).Luke D.A. A User's guide to network analysis in R. Springer, 2015. P. 94-95. https://doi.org/10.1007/978-3-319-23883-8_2.Luke D.A. A User's guide to network analysis in R. Springer; 2015, p. 94-95. https://doi.org/10.1007/978-3-319-23883-8_2.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.