Способ механической активации суспензии спор черного трюфеля

Истинные трюфели, или грибы рода Tuber, являются одними из самых ценных, редких, дорогих и загадочных грибов на планете. Размножение трюфелевых грибов в дикой природе является сложным процессом, который зависит от многих факторов, например, от присутствия подходящих деревьев-хозяев, оптимальных параметров температуры, влажности, pH почвы, почвенных симбионтов и других организмов. Так, для успешного производства и размножения трюфелей требуется соблюдение множества условий, а главное – высвобождение их спор из асков, прорастание в благоприятных условиях и распространение в природной среде. Целью представленного исследования являлась разработка метода механического разрушения асков для высвобождения спор черного трюфеля. Показано, что высокоэффективным способом разрушения асков является гомогенизация с использованием погружного блендера в тандеме с вибрационным измельчителем. Микроскопирование образцов на всех этапах эксперимента позволило установить, что такой способ приводит к разрушению не менее 85% асков и высвобождению спор трюфеля. При использовании подходов центрифугирования представляется возможным отделить споры черных трюфелевых грибов от обломков гифов, грибных симбионтов и различных ассоциированных организмов. Такие споры способны к образованию мицелия на питательных средах. Результаты исследования могут быть использованы для подготовки посевного материала Tuber sp. и получения их чистых культур. Таким образом, внедрение способов высвобождения спор из асков способствует повышению эффективности культивации черного трюфеля.

1. Ori F., Hall I., Gianchino C., Iotti M., Zambonelli A. Truffles and morels: two different evolutionary strategies of fungal-plant interactions in the Pezizales // Plant microbe interface / eds A. Varma, S. Tripathi, R. Prasad. Cham: Springer, 2019. P. 69–93. DOI: 10.1007/978-3-030-19831-2_3.

2. True truffle (Tuber spp.) in the world / eds A. Zambonelli, M. Iotti, C. Murat. Cham: Springer, 2016. 436 p. DOI: 10.1007/978-3-319-31436-5.

3. Marozzi G., Benucci G.M.N., Turchetti B., Massaccesi L., Baciarelli F.L., Bonito G., et al. Fungal and bacterial diversity in the Tuber magnatum ecosystem and microbiome // Environmental Microbiology. 2023. Vol. 85. P. 508–521. DOI: 10.1007/s00248-021-01950-1.

4. Vahdatzadeh M., Deveau A., Splivallo R. Are bacteria responsible for aroma deterioration upon storage of the black truffle Tuber aestivum: a microbiome and volatilome study // Food Microbiology. 2019. Vol. 84. P. 103251. DOI: 10.1016/j.fm.2019.103251.

5. Splivallo R., Deveau A., Valdez N., Kirchhoff N., Frey-Klett P., Karlovsky P. Bacteria associated with truffle-fruiting bodies contribute to truffle aroma // Environmental Microbiology. 2015. Vol. 17, no. 8. P. 2647–2660. DOI: 10.1111/1462-2920.12521.

6. Allen K., Bennet J.W. Tour of truffles: aromas, aphrodisiacs, adaptogens, and more // Mycobiology. 2021. Vol. 49, no. 3. P. 201–212. DOI: 10.1080/12298093.2021.1936766.

7. Zambonelli A., Iotti M., Hall I. Current status of truffle cultivation: recent results and future perspectives // Mycologia Italiana. 2015. Vol. 44, no. 1. P. 31–40. DOI: 10.6092/issn.2465-311X/5593.

8. Hall I.R., Fitzpatrick N., Miros P., Zambonelli A. Counter-season cultivation of truffles in the Southern Hemisphere: an update // Italian Journal of Mycology. 2017. Vol. 46. P. 21–36. DOI: 10.6092/issn.2531-7342/6794.

9. Reyna S., Garcia-Barreda S. Black truffle cultivation: a global reality // Forest Systems. 2014. Vol. 23, no. 2. P. 317–328. DOI: 10.5424/fs/2014232-04771.

10. Deveau A., Clowez P., Petit F., Maurice J.-P., Todesco F., Murat C., et al. New insights into black truffle biology: discovery of the potential connecting structure between a Tuber aestivum ascocarp and its host root // Mycorrhiza. 2019. Vol. 29. P. 219–226. DOI: 10.1007/s00572-019-00892-4.

11. Gómez-Molina E., Sánchez S., Puig-Pey M., Garcia-Barreda S. Sequential application of inoculation methods improves mycorrhization of Quercus ilex seedlings by Tuber melanosporum // Fungal Biology. 2023. Vol. 127, no. 10-11. P. 1328–1335. DOI: 10.1016/j.funbio.2023.07.004.

12. Пат. 23874A4, Республика Казахстан, C12N 1/14, C12M 1/24. Способ и устройство для получения биомассы трюфеля и других съедобных грибов / Р.К. Блиева, Д.Н. Козыбаева, Ж.Б. Сулейменова, Е.Н. Блиев, Д.Н. Блиев. Опубл. 15.04.2011. Бюл. № 4.

13. Pat. no. CN108934768B, China. Black spore truffle inoculation microbial inoculum, treatment method thereof and mycorrhiza cultivation method / X. Li, L. Ye, J. Zou, J. Zong, D. Wang, X. He, et al. Published 24.11.2020.

14. Pat. no. TW202038705A, Taiwan. Preparation method of truffle strain liquid and cultivation method of truffle mycorrhizal seedling / C.-M. Chen, H.-W. Huang, T.-C. Lin, S.-B. Lin. Published 01.11.2020.

15. Garcia-Barreda S., Marco P., Bonito G., Parladé J., Sánchez S., González V., et al. Interannual dynamics of Tuber melanosporum and fungal communities in productive black truffle orchards amended with truffle nests // FEMS Microbiology Ecology. 2023. Vol. 99, no. 8. DOI: 10.1093/femsec/fiad084.

16. Morte A., Arenas F., Marqués-Gálvez J.E., Andrino A., Guarnizo Á.L., Gutiérrez A., et al. Desert truffles (Terfezia spp.) breeding // Advances in plant breeding strategies: vegetable crops / eds J.M. Al-Khayri, S.M. Jain, D.V. Johnson. Cham: Springer, 2021. P. 479–504. DOI: 10.1007/978-3-030-66969-0_13.

17. Elliott T.F., Vernes K. Superb Lyrebird Menura novaehollandia emycophagy, truffles and soil disturbance // IBIS. 2019. Vol. 161, no. 1. P. 198–204. DOI: 10.1111/ibi.12644.

18. Ori F., Menotta M., Leonardi M., Amicucci A., Zambonelli A., Covès H., et al. Effect of slug mycophagy on Tuber aestivum spores // Fungal Biology. 2021. Vol. 125, no. 10. P. 796–805. DOI: 10.1016/j.funbio.2021.05.002.

19. Thomas P.W., Thomas H.W. Mycorrhizal fungi and invertebrates: Impacts on Tuber melanosporum acospore dispersal and lifecycle by isopod mycophagy // Food Webs. 2022. Vol. 33. P. e00260. DOI: 10.1016/j.fooweb.2022.e00260.

20. Mello A., Zampieri E., Zambonelli A. Truffle ecology: genetic diversity, soil interactions and functioning // Mycorrhiza – function, diversity, state of the art / eds A. Varma, R. Prasad, N. Tuteja. Cham: Springer, 2017. P. 231–252. DOI: 10.1007/978-3-319-53064-2_11.